ACARA VII
STERILISASI MEDIA
A. TUJUAN
Mahasiswa dapat mengetahui dan melakukan sterilisasi media pada kultur jaringan dengan baika dan benar.
B. TINJAUAN PUSTAKA
Sterilisasi merupakan suatu proses untuk membebaskan alat, media, bahan dari mikroorganisme kontaminan yang tidak diinginkan. Baik berupa bakteri patogen dan apatogen Sterilisasi menjadi suatu hal yang perlu diperhatikan ketika ingin melakukan penilitian atau praktikum, karena sterilisasi sangat berperan penting dalam membunuh mikroba yang dapat mengganggu proses pengamatan akibat kontaminan dari bakteri yang tidak diinginkan.
Media merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrien. Umumnya, mengandung air, sumber energi, sulfur, fosfat, oksigen serta hidrogen. media ini bertujuan untuk pembiakan, isolasi, pegujian sifat sifat fisiologis, dan perhitungan jumlah mikroba.
Media sintesis adalah media yang yang susunan kimianya dapat diketahui dengan pasti. Media sintesik dibuat dari ekstrak dari bahan-bahan yang mengandung nutrisi sesuai dengan kebutuhan mikroba seperti ekstrak daging, kentang, ragi dan sebagainya. contohnya yaitu media NA (Natrium Agar), PDA (Potato Dextrose Agar), dan PCA (Plate Count Agar). Pada percobaan pembuataan media harus dalam keadaan steril agar mikroba yang tidak diharapkan tidak dapat tumbuh. Hal ini sesuai dengan pendapat (Suriawiria, 2005). Dalam laboratorium mikrobiologi, diperlukan media nutrien dan peralatan yang steril. Keadaan yang tidak steril dapat menyebabkan tumbuhnya mikroba pencemar (kontaminan) yang akan mengganggu pengamatan terhadap mikroba yang ditumbuhkan.
C. TEMPAT DAN TANGGAL
- Tempat : Arboretum Kehutanan dan KP2
- Tanggal : 13 Maret 2020
D. ALAT DAN BAHAN
a) Alat
- Botol
- Autoclaft
- Kapas
- Ent-case
b) Bahan
- Potassium nitrate : 250 mg
- Potassium phosphate : 250 mg
- Magnesium sulfate : 250 mg
- Ammonium sulfate : 500 mg
- Tricalcium phosphate : 200 mg
- Farric tartrate : 28 mg
- Manganese sulfate : 7,5 mg
- Sacrose (gula pasir) : 20 gr
- Aquadest : PH 4,0- 5,6
- Agar-agar : 8 gr
- Kentang rebus : 150 gram
- Pisang : 150 gram
- Norit arang aktif : 2 tablet
- Vitamin B1 : 2 pipet tetes
E. CARA KERJA
- Menyiapkan alat dan bahan.
- Membuat media cair dari bahan bahan yang telah disediakan
- Memasukan media yang sudah jadi kedalam botol yang sudah di sterilkan sebelumnua, media masih dalam keadaan panas/hangat dan langsung ditutup dengan kapas.
- Memanaskan botol kedalam autoclaft manual dengan suhu 120 derajat dan bertekanan 15-20
- Menarik katup autoclaft agar uap dari dalam autoclaft keluar
- Memindahkan botol dari autoclaft ke dalam ruang isolasi.
F. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada praktikum kali ini kami melakukan kegiatan praktikum dengan judul “Sterilisasi Media” Sterilisasi Sendiri merupakan suatu proses untuk membebaskan alat, media, bahan dari mikroorganisme kontaminan yang tidak diinginkan. Baik berupa bakteri patogen dan virus, karena sterilisasi sangat berperan penting dalam membunuh mikroba yang dapat mengganggu proses pengamatan akibat kontaminan dari bakteri yang tidak diinginkan.
adapun tahapan sterilisasi media meliputi :
Baca juga : Mengenal Jenis-Jenis Buah Kakao
Gambar 7.1 Menyiapkan botol yang sudah steril
Media kultur jaringan sendiri merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrien. Umumnya, mengandung air, sumber energi, sulfur, fosfat, oksigen serta hidrogen. media ini bertujuan untuk pembiakan, isolasi, pegujian sifat sifat fisiologis, dan perhitungan jumlah mikroba. Pertama yaitu menyiapkan botol yang sudah dcuci menggunakan sabun pembersih kemudian dibilas dengan aquades dan digojok serta dibilas dengan alkohol agar botol benar-benar bersih dan steril dari sisa-sisa kotoran dari dalam botol tersebut. Kemudian dikeringkan dan kemudian ditutup menggunakan kapas agar tidak adanya mikroorganisme yang masuk. Alcohol memiliki sifat untuk membunh microorganisme sehingga microorganisme tidak dapat hidup di alat yang di cuci dengan alcohol lalu dipanaskan dengan autoclave.
Gambar 7.2 Memasukan media kedalam botol
Kemudian memasukan campuran media yang sudah dibuat sebelumnya Media harus segera dimasukan botol saat masih dalam keadaan panas Media yang dipakai harus segera dimasukan setelah panas karena media berbentuk agar dan di takutkan memadat jika suhunya sudah turun. dan langsung ditutup dengan kapas, agar media tidak terkontaminasi dengan bakteri yang ada disekitarnya. Kapas yang digunakan untuk menutup mulut botol untuk mencegah mikroorganisme masuk ke dalam botol. Media ini sebelumnya sudah disiapkan tim lab dengan campuran bahan sebagai berikut seperti potassium nitrate (250 mg), potassium phosphate (250 mg), magnesium sulfste (250 mg), ammonium sulfate (500 mg), tricalcium phosphate (200 mg), farric tartrate (28 mg), manganese sulfate (7,5 mg), sacrose (gula pasir) (20 gr), aquadest (ph 4,0- 5,6), agar-agar (8 gr), kentang rebus (150 gram), pisang (150 gram), norit arang aktif (2 tablet), vitamin b1 (3 pipet tetes). Gula pasir digunakan untuk memenuhi kebutuhn gula, agar-agar sebagai bahan pemadat, kentang digunakan sebagai sumber karbohidrat, pisang digunakan sebagai penambah vitamin B1 dan gula.
Gambar 7.3 memasukan botol ke autoclave
Menata Botol dengan posisi vertical kedalam autoclave untuk dilakukan sterilisasi, posisi vertical ini dilakukan agar media terkumpul di dasar botol dan tidak melebar di didnding botol, sterilisasi ini dilakukan dengan metode penguapan panas dengan temperature 1210 C selama 15 menit-20 menit hal ini dilakukan agar mikroorganisme benar-benar mati dan steril baik dari media maupun botol.
Baca juga : Transistor : Pengertian, Kegunaan dan Jenisnya
Gambar 7.4 Menutup autoklaf.
Menutup autoclave dan menguncin penutup pada sekitar tutup dan badan autocalve yang bertjuan agar tidak ada uap yang keluar dari bibir autoklaf sehingga proses sterilisasi bisa berhasil, tetapi jika uap keluar dari autoklaf maka proses sterilisasi harus diulangi dan dilakukan dengan sempurna agar panas tidak turun dan susah naik sehingga proses sterilisasi dapat berjalan baik.
Gambar 7.5 Menyalakan autoklaf
Lalu menyalakan autoclave sekaligus mengatur waktu kerja autoclave untuk sterilisasi media dengan waktu minimal 2 jam dan suhu berkisar 1210 C dengan tekanan 15-20 psi dan dilakukan pengamatan pada menitke 15 menit untuk pengamatan. Hal ini dilakukan agar botol-botol tersebut sudah bebas dari bakteri. Adapun beberapa kelebihan autoklaf yaitu waktu yang dibutuhkan untuk proses sterilisasi sedikit karena ada bantuan panas dan uap, dapat digunakan untuk sterilisasi hampir semua alat, termasuk alat ukur. Kekuranganmya adalah ada tetesan uap air pada alat dan bahan yang disterilkan, uap air yang menetes dapat merusak media-media tertentu jika tidak dilakukan dengan rapih dan teliti.
Gambar 7.6 Memindahkan botol-botol dari dalam autoclave ke Ent-case atau laminar airflow
Setelah selesai dilakukan sterilisasi di autoclave alat dibiarkan dingin sebentar lalu botol yang telah dingin dikeluarkan dan kemudian dipindahkan kedalam Ent-case agar tetap steril sampai media terbentuk agar tetap steril dari mikroba. Media akan memadat apabila telah didinginkan. Posisi penyusunan botol harus dalam keadaan tegak atau berdiri agar media terkumpul di dasar botol dan memudahkan saat proses menanam.
Baca juga : Resistor : Kegunaan, Bentuk dan Jenisnya
F. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil praktikum acara VII tentang “sterilisasi media”, praktikan dapat menyimpulkan bahwa :
- Sterilisasi merupakan suatu proses pembebasam alat, media, maupun bahan dari mikroorganisme kontaminan yang tidak diinginkan.
- Media kultur jaringan sendiri merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrien. Umumnya, mengandung air, sumber energi, sulfur, fosfat, oksigen serta hidrogen.
- Saat sterilisasi media peletakan botol berbeda dari sebelumnya . Menata Botol harus dengan posisi vertikal didalam autoclafe dan ent-case hal ini dilakukan agar media terkumpul di dasar botol dan tidak melebar di didnding botol dan juga media tidak rusak.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2020. Bahan Ajar Propagasi Vegetatif. Fakultas kehutanan INSTIPER Yogyakarta.
Anonim. 2016. https://www.slideshare.net/mobile/dian0911/laporan-sterilisasi-pembuatan-media-dan-teknik-inokulasi. Diakses pada 28 Maret 2020, pukul 20.30 WIB.
Pertama, Padli. 2017. https://padlipratama.wordpress.com/sterilisasi-dan-pembuatan-media/. Diakses pada 30 Maret 2020, pukul 20.37 WIB.